Ako merať bakteriálny rast

Obsah

• stupňa
• Metóda 1 Pozorujte baktérie priamo
• Metóda 2 Meranie biomasy
• Metóda 3 Postupujte turbidimetricky

V tomto článku: Priame pozorovanie baktériíZískajte biomasuPostup pomocou turbidimetrie8 Referencie

Existuje niekoľko spôsobov, ako merať bakteriálny rast, a niektoré sa implementujú ťažšie ako iné. Najjednoduchšie sa bežne používajú a poskytujú relatívne presné výsledky za predpokladu, že sú počas merania prísne. Najbežnejšie techniky sú pozorovanie a počítanie baktérií, meranie biomasy a suchej biomasy a turbidimetria. Vaše školské laboratórium by malo mať vybavenie potrebné na aspoň jednu z týchto metód.

stupňa

Metóda 1 Pozorujte baktérie priamo

1. 
   

   
   Pripravte zariadenie. Okrem toho, čo sa zvyčajne vyskytuje vo všetkých biologických laboratóriách, budete potrebovať aj niektoré konkrétne položky. Uistite sa, že máte všetky nástroje a nádoby po ruke po ruke, takže nemusíte chodiť tam a späť v skrini, kde je zariadenie uložené. Premýšľajte o tom, čo budete robiť, aby ste vedeli, čo budete používať v každej fáze. Budete tiež musieť poznať niektoré kľúčové pojmy.
   • Získajte hemacytometer. Je to čepeľ s komorami číslovania, ktorá je spojená s mikroskopom. Je to veľmi jednoduchý nástroj na nastavenie a používanie. Nájdete ich od dodávateľov špecializujúcich sa na vybavenie pre školy a výskumné laboratóriá. Zvyčajne je k dispozícii užívateľská príručka.
   • Vezmite Petriho misku. Jedná sa o malý, okrúhly plytký kontajner, v ktorom môžete pozorovať baktérie.
   • Pojem „kultúra“ sa vzťahuje na mikroorganizmy, ktoré sa umelo množia ako súčasť vedeckého experimentu.
   • „Vývar kultúry“ je médium, v ktorom sa bude kultúra rozvíjať.

2. 
   

   
   
   
   Použite Petriho misku. Vložte baktérie do škatule a pozorujte ich pod mikroskopom. Môžete ho tiež umiestniť priamo na snímku. Potom spočítajte počet prítomných bakteriálnych buniek.

3. 
   

   
   Uistite sa, že máte správnu koncentráciu. Ak je príliš veľa baktérií, prekrývajú sa a nebudete ich môcť správne spočítať. Ak je to tak, kultúru rozriedite zmiešaním s malým vývarom. Ak je ich príliš málo, výsledok nebude významný. Potom musíte filtrovať vývar, aby ste zvýšili koncentráciu.

4. 
   

   
   Počítajte baktérie. Posledným krokom je jednoducho spočítať. Pozrite sa na počítacie komory pod mikroskopom a poznačte si počet buniek, ktoré vidíte. Porovnajte výsledok s inými podobnými skúsenosťami.

Metóda 2 Meranie biomasy

1. 
   

   
   
   
   Skontrolujte, či máte potrebné nástroje. Implementácia tejto metódy je pomalá a vyžaduje si použitie drahého vybavenia. Ak to neumývate, použite inú techniku. Na druhej strane, ak máte v laboratóriu správne nástroje, meranie biomasy a suchej hmoty je ideálne, pretože poskytuje presné výsledky. Potrebujete:
   • hydraulická rúra s núteným prúdením,
   • hliníková vážiaca misa,
   • niekoľko Erlenmeyerových baniek,
   • odstredivka alebo laboratórny filtračný systém.

2. 
   

   
   Skontrolujte, či sa plodina nachádza v Erlenmeyerovej banke. Ak to tak nie je, vylejte ho. V tejto fáze experimentu sú baktérie stále v kultivačnom médiu. Budú oddelené neskôr.

3. 
   

   
   Vážiaca misa sa vysuší. Vložte ho do rúry. Môžete tiež použiť membránový filter z acetátu celulózy s priemerom 47 mm s pórmi 0,45 μm. Nech sa použije ktorýkoľvek nástroj, zmerajte jeho hmotnosť presne tak, aby sa mohla odpočítať od výsledkov, ktoré získate po umiestnení plodiny.

4. 
   

   
   Mix. Premiešajte lerlenmeyerovú vrstvu, aby bola kultúra homogénna. V dôsledku gravitácie majú bunky prirodzene tendenciu padať na dno nádoby. Takže musíte trochu pretrepať, pre ktoré sú distribuované jednotným spôsobom a že vaša vzorka je reprezentatívnejšia.

5. 
   

   
   Odstredivka. Pomocou odstredivky oddeľte baktérie od kultivačného média. Toto zariadenie sa používa na otáčanie nádoby a protizávažia veľmi vysokou rýchlosťou. Vývar výtoku, ktorý udržuje iba živú hmotu. Pre viac informácií nájdete informácie o tom, ako používať odstredivku na internete.

6. 
   

   
   Získajte cesto. Položte ho na vážiacu misku. Kultúrny vývar môžete hádzať, už ho viac nebudete potrebovať, ale majte na ruke lerlenmeyer.

7. 
   

   
   Opláchnite odstredivku. Vypláchnite oplachovaciu vodu na vážiacu misku okrem bakteriálnych buniek. Výsledok získaný pre všetko vám dáva biomasu.

8. 
   

   
   Nájdite suchú hmotu. Ak chcete poznať suchú biomasu vo vašej vzorke, vložte misku na váženie do rúry nastavenej na 100 ° C na dobu 6 až 24 hodín, podľa pokynov dodaných so zariadením. Dbajte na to, aby ste túto teplotu neprekročili, aby nedošlo k spáleniu baktérií. Potom všetko odvážte a potom odčítajte hmotnosť zásobníka.

Metóda 3 Postupujte turbidimetricky

1. 
   

   
   Pripravte si vybavenie. Budete potrebovať svetelný zdroj a spektrofotometer, zariadenie nachádzajúce sa vo väčšine vedeckých laboratórií. Pozrite si dodanú používateľskú príručku, pretože každý model má svoju vlastnú činnosť. Táto metóda je jedným z najčastejšie používaných na meranie bakteriálneho rastu, pretože vyžaduje iba lacné a ľahko použiteľné nástroje.

2. 
   

   
   Vneste svetlo do kultúry. Zakalenie sa používa na vyhodnotenie obsahu kvapaliny v časticiach, jej množstvo je určené na určenie, či je viac alebo menej zakalená. Výsledok, ktorý získate z tohto merania, bude uvedený v NTU (alebo v nefelometrických jednotkách zákalu). Môže byť potrebné vykonať kalibráciu zariadenia, aby bolo možné presne zmerať zákal vzorky.

3. 
   

   
   Robte si poznámky. Zákal je množstvo baktérií vo vzorke. Spektrofotometer vám tiež umožní zistiť priepustnosť roztoku (% T), ktorého hodnota je nepriamo úmerná hodnote zákalu. Potom porovnajte výsledky získané na rôznych vzorkách na meranie bakteriálneho rastu.